SDS电泳是一种常用的蛋白质分离技术,通过SDS(十二烷基硫酸钠)的变性作用和电场的作用,使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中分离。以下是SDS电泳操作步骤的详细解析。
-丙烯酰胺:29.2g
亚甲基双丙烯酰胺:0.8g
双蒸水:加入双蒸水至100mL
H值:确保H值不超过7.0
储存:容器外包锡纸,4℃冰箱保存-Tris-HCl:1.5M
双蒸水:适量
SDS:适量
TEMED:适量
甘油:适量-将洁净、无水的玻片对齐,形成空腔,插入塑料框的凹槽中,注意箭头向上,并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧,下端紧贴密封条。
3.2分离胶的配置-10%分离胶配方:
蒸馏水:适量
30%丙烯酰胺:适量
10%SDS:适量
1.5MTris-HCl(H8.8):适量
TEMED:适量
甘油:适量-将配制好的分离胶小心倒入组装好的胶架中,注意避免气泡的产生。等分离胶凝固后,再制作浓缩胶。
-将浓缩胶小心倒入分离胶之上,同样注意避免气泡。
-使用双蒸水清洗电泳槽和玻璃板,去除杂质。使用固定液固定蛋白质,以便后续分析。
-在内槽中加入电泳缓冲液,拔出样梳。
将内槽置于外槽内,在外槽中也加入电泳缓冲液。
上样,将蛋白加到点样孔中。
接通电源,电泳,至溴酚蓝距凝胶边缘约0.5~25x时,停止电泳。-加入考马斯亮蓝染色液,染色。使用脱色液脱色,直至背景清晰。
-在电泳涂装过程中应尽量防止杂质离子带入电泳液中,以保证涂装质量。
-在电泳涂装时,带电荷的粒子(树脂和颜填料)在电场作用下到达相反电荷的电极,被H(阳极电泳)OH(阴极电泳)。
通过以上步骤,可以成功进行SDS电泳实验,从而实现对蛋白质的有效分离和分析。